3D4/21細胞

一．培養基及培養凍存條件準備：

1. 準備RPMI-1640培養基，90%；優(yōu)(yōu)質(zhì)(zhì)胎牛血清，10%。
2. 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
   • 細胞處理：
4. 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
5. 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)(jìn)行傳代培養。
6.  

1.      將培養瓶中細胞輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液。

2.      根據細胞的生長(cháng)(cháng)狀態(tài)(tài)，按1:2或以上比例用新鮮培養基重懸細胞，將合適量培養液移入到T-25培養瓶中或T-75培養瓶中培養。

3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)(cháng)狀態(tài)(tài)良好時(shí)(shí)，可進(jìn)(jìn)行細胞凍存。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)(gè)凍存管細胞數目大于1X10⁶個(gè)(gè)細胞凍存。